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BMG:金標準熒光偏振高通量實時監測泛素化修飾
來源: Admin    更新時間: 2020-09-24    瀏覽: 50 人次

蛋白質泛素化修飾及其介導的蛋白質降解調控至機體內大量生命活動,其異常調節可導致各種重大疾病,如癌癥,神經退行性疾病及自身免疫性疾病等。深入研究蛋白質泛素化調控對于了解重大疾病機制及其治療具有重要意義。近來,越來越多新藥研發工作也開始關注于通過PROTACs分子靶向降解泛素化蛋白進行新藥研發。


然而,針對泛素化不同酶活性分析,之前一直沒有合適的高通量酶分析方案。傳統方案主要是凝膠電泳分析法,耗時長,成本高,通量低。此外,目前在用的一些高通量泛素化檢測方法,如ELISA,HTRF和AlphaScreen等,也只是檢測泛素化后的底物或者底物蛋白鄰居的泛素,仍無法精準分析泛素化介導蛋白質降解的具體過程。


近日,Tyler G.Franklin等研究人員1開發出一種新方案-UbiReal(圖1),利用BMG CLARIOstar熒光偏振超靈敏性以及長時間檢測超高穩定性,對底物蛋白泛素化修飾整個過程進行精準實時監測。通過熒光標記泛素,可設計出熒光偏振高通量精準實時監測體系,不僅可對泛素化修飾整個過程不同階段的酶,如泛素激活酶E1,泛素結合酶E2,泛素連接酶E3和去泛素化酶DUBs等進行酶活性和酶特異性超靈敏分析,同時可對單泛素化以及多泛素化等不同泛素化修飾類型進行區分檢測。此方案的超靈敏性,高穩定性以及應用簡易靈活性,不僅可為泛素化相關酶活性調節分子高通量篩選提供極佳應用方案,也可為蛋白質泛素化相關機制基礎研究提供極具應用價值的參考方案。



圖1,UbiReal-蛋白質泛素化修飾整個過程,不同階段熒光偏振法實時監測示意圖


熒光染料標記的泛素為示蹤物小分子,在溶液中自由旋轉較快,被檢測到的偏振值;一旦結合其他不同的酶等大分子形成復合物,其自由旋轉速度變慢,被檢測到偏振值升高


更多詳細資料,請參考:

1,Franklin T G, Pruneda J N. A high-throughput assay for monitoring ubiquitination in real time[J]. Frontiers in Chemistry, 2019, 7.

2,https://www.bmglabtech.com/ubiquitination-monitoring-in-real-time-the-fluorescence-polarization-based-method-ubireal/



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